WB全称为蛋白质免疫印迹，是蛋白质定量最常用的技能之一，是将蛋白质搬运到膜上，然后使用抗体进行细心的检测的办法。本文依据

  倒掉培养液，用PBS洗刷，弃净PBS，参加裂解液，置于冰上裂解10min，用细胞刮刀及移液枪将细胞碎片及裂解液移至1.5mL离心管，持续裂解20min。然后于4℃离心机离心（14000 rpm，15min），取上清，置于-20℃冰箱保存。

  制造BCA工作液（A:B=50:1），在96孔板上每孔参加100uL BCA液，参加20uL样品，每个样品做3个重复，避光37℃反响30 min，562 nm测定，核算蛋白浓度。

  玻璃板夹好，检漏完成后参加10%别离胶。参加异丙醇，约30 min后别离胶凝结，倒去异丙醇，参加5%浓缩胶。刺进梳子，约30min后浓缩胶凝结，放入电泳槽。

  制造上样的样品，100℃金属浴15min，上样和marker，60V电泳，跑过浓缩胶后可加到120V，跑至底层后中止。

  三明治结构：黑色夹子面+海绵垫+三层滤纸+胶+膜+三层滤纸+海绵垫+通明夹子面，夹紧。放入搬运槽，黑色夹子面临槽的黑色一面，通明夹子面临槽的赤色一面，放入冰中，或在 4℃冰箱转膜，250mA，2.5h。用丽春红染色后切膜，用TBST洗净。

  以TBST作溶剂制造5%脱脂奶粉。膜浸泡于5%脱脂奶粉种，在摇床上低速摇晃，关闭2 h，弃去5%脱脂奶粉。参加TBST于摇床上高速摇晃，洗刷5 min，重复三次。

  收回一抗，用TBST洗刷15 min，重复三次。参加对应的二抗，于摇床上常温孵育2h，TBST洗刷15min，重复三次。

  将显影A液和B液以1:1制造，将膜浸入显影液5s后，即可在曝光机上曝光。